ВЛИЯНИЕ ГУМАТА КАЛИЯ НА ФЕРМЕНТНЫЙ ПРОФИЛЬ ГЕПАТОЦИТОВ ЦЫПЛЯТ-БРОЙЛЕРОВ

Полный текст

В настоящее время проблема гепатитов занимает ведущее место среди заболеваний гепатобилиарной системы у животных. Особенно часто поражения печени наблюдаются у цыплят-бройлеров, содержащихся в крупных птицеводческих хозяйствах, где высокая концентрация поголовья требует постоянного применения антибактериальных препаратов, вакцин и других средств, чтобы сдержать развитие инфекционных и инвазионных заболеваний. При организации биологически полноценного кормления животных и птицы основной проблемой является изыскание дополнительных природных кормовых средств, разработка и организация производства премиксов, балансирующих добавок, обеспечивающих повышение использования питательных веществ рационов [3, 6]. Среди безопасных и перспективных биологически активных веществ заслуживают внимания соединения природного происхождения, в частности, гуминовые вещества. В настоящее время во всем мире наблюдается повышенный интерес к гуминовым веществам, совершенствуются технологии производства, расширяется сырьевая база, в которую вовлекаются все новые виды углей, торфов, сланцев, пелоидов [4]. Гуминовые вещества представляют собой макрокомпоненту органического вещества почвенных и водных экосистем, а также твердых горючих ископаемых. Общепринятая классификация гуминовых веществ основана на различии в растворимости в кислотах и щелочах. Согласно этой классификации их подразделяют на три составляющие: гумин - не извлекаемый остаток, нерастворимый ни в щелочах, ни в кислотах; гуминовые кислоты - фракция гуминовых веществ, растворимая в щелочах и нерастворимая в кислотах (при рН < 2); фульвокислоты - фракция гуминовых веществ, растворимая и в щелочах, и в кислотах. В качестве обобщающего названия, обозначающего как гуминовые, так и фульвокислоты, применяют термин «гумусовые кислоты». Гумусовые кислоты являются наиболее подвижной и реакционоспособной компонентой гуминовых веществ, активно участвующей в химических процессах, протекающих в экосистемах [4]. В настоящее время существует несколько областей применения гуминовых веществ. Одним из направлений является способность гуминовых веществ связывать ионы металлов и органические соединения, что позволяет использовать их в качестве кормовых и пищевых добавок, содержащих микроэлементы; а также как энтеросорбенты, применяемые в ветеринарии [2]. Проблема использования биологически активных добавок на основе гуминовых веществ в рационах для нормализации обменных процессов, повышения переваримости, усвояемости питательных веществ кормов, естественной резистентности, сохранности и продуктивности сельскохозяйственных животных и птиц, является актуальной и требует дальнейшего изучения. Цель исследований - повышение активности ферментов печени путем использования гумата калия. Задачи исследований - определить влияние гумата калия на реакцию системы ферментов печени цыплят-бройлеров. Материалы и методы исследований. Было сформировано 2 группы цыплят суточного возраста по 90 особей. Первая контрольная группа получала основной рацион, а в рацион второй группы добавляли гумат калия в дозе 10 мг/1000 г массы цыпленка. Из групп птиц методом случайной выборки каждые 5 суток отбирали по 10 цыплят, на которых проводили эвтаназию в соответствии с этическими нормами, и их печень извлекалась для анализа. После извлечения печень промывали физиологическим раствором и сразу замораживали. Гомогенат из печени готовился механическим измельчением ткани печени массой 1 г с 9 мл трис-буфера (рН 7,4), со скоростью 5000 об/мин в сосуде с двойными стенками, постоянно охлаждаемым проточной водой [1]. Состояние ферментативной системы печени подопытной птицы оценивали по активности каталазы, супероксиддисмутазы (СОД), глутатионпероксидазы (ГП), щелочной фосфатазы (ЩФ), аланинаминотрансферазы (АлАТ) и аспартатаминотрансферазы (АсАТ), а также по количеству малонового диальдегида (МДА). Для определения активности АлАТ и АсАТ использовали стандартные наборы «Bio-La-Tes». Активность каталазы определяли по стандартной методике М. А. Королюка, активность ГП - по методу В. М. Мойн, активность СОД - по методу В. С. Гуревича и соавторов. Концентрацию МДА определяли спектрофотометрически при 534 нм [1]. Цифровой материал исследований подвергался математической обработке с вычислением среднестатистических ошибок и критерия достоверности р. Различия считали достоверными при р<0,05. Результаты исследований. Показатели ферментного профиля гепатоцитов подопытной птицы, под действием исследуемых биологически активных веществ, представлены в таблице 1. Таблица 1 Показатели ферментного профиля гепатоцитов цыплят при дополнительной нагрузке раствором гумата калия Показатель группы Возраст, сутки 5 10 15 20 25 30 35 40 45 Активность АсАТ, мкмоль/с•л контроль 0,14±0,006 0,15±0,005 0,16±0,007 0,18±0,006 0,20±0,007 0,23±0,008 0,23±0,009 0,24±0,008 0,26±0,009 гумат калия 0,15±0,004 0,17±0,0061 0,19±0,007 0,22±0,007 0,24±0,008 0,28±0,0091 0,29±0,0091 0,29±0,0101 0,30±0,0091 Активность АлАТ, мкмоль/с•л контроль 0,80±0,025 0,84±0,024 0,89±0,031 0,96±0,037 1,03±0,035 1,09±0,040 1,14±0,042 1,18±0,045 1,20±0,038 гумат калия 0,78±0,029 0,86±0,028 0,91±0,034 1,00±0,034 1,10±0,039 1,19±0,043 1,24±0,041 1,31±0,044 1,37±0,048 Активность СОД, АЕД/мин•мг белка печени контроль 0,76±0,024 0,86±0,030 0,99±0,034 1,11±0,042 1,18±0,038 1,21±0,039 1,22±0,043 1,28±0,049 1,24±0,040 гумат калия 0,78±0,023 0,86±0,026 0,92±0,028 1,09±0,034 1,20±0,0431 1,33±0,0401 1,42±0,0411 1,39±0,0451 1,38±0,0461 Активность ГП, мкмоль/мин•мг белка печени контроль 0,87±0,031 0,90±0,036 0,92±0,032 0,98±0,036 1,01±0,030 1,08±0,037 1,15±0,036 1,20±0,042 1,30±0,042 гумат калия 0,90±0,033 0,95±0,027 1,09±0,0381 1,15±0,0391 1,21±0,0351 1,31±0,0421 1,42±0,0461 1,55±0,0481 1,67±0,0571 Активность ЩФ, АЕД/мг белка печени контроль 2554±91,94 2683±77,81 2871±109,10 3033±106,16 3244±94,08 3459±107,23 3242±116,71 3149±97,62 2964±115,60 гумат калия 2587±82,78 2691±96,88 2733±84,72 2897±110,09 3058±103,97 3093±104,351 2913±87,391 2721±103,401 2584±74,941 Активность каталазы, мкмоль Н2О2/л•мин•103 контроль 45,80±1,740 46,70±1,680 47,20±1,560 48,10±1,730 49,60±1,980 48,40±1,980 48,70±1,850 51,60±1,960 52,20±1,980 гумат калия 42,60±1,450 43,30±1,640 43,80±1,490 44,20±1,640 44,70±1,610 45,10±1,810 45,30±1,770 46,20±1,620 45,30±1,6101 Концентрация МДА, Мкмоль/л контроль 1,48±0,055 1,51±0,048 1,55±0,053 1,60±0,062 1,63±0,063 1,87±0,073 1,85±0,072 1,91±0,080 1,93±0,075 гумат калия 1,42±0,054 1,33±0,0541 1,37±0,0511 1,41±0,049 1,42±0,0581 1,63±0,0541 1,70±0,056 1,74±0,068 1,71±0,0671 Примечание: различия достоверны при P<0,05: 1 - по сравнению с показателями животных контрольной группы. Активность ферментов повышается с возрастом цыплят как контрольной, так и опытной групп, при этом у животных опытной группы отмечается увеличение активности аспартатаминотрансферазы с 35 по 45 сутки. На 45 сутки этот показатель достиг 16,80% (P<0,05) по отношению к показателям интактных животных. Изменение активности аланинаминотрансферазы в ходе всего эксперимента было незначительным, составляя 14,21% относительно контроля. В опытной группе наблюдалось повышение активности супероксиддисмутазы у цыплят в возрасте 25-45 суток на 11,43% (P<0,05) относительно данного показателя интактных животных. Активность глутатионпироксидазы в группе птиц, получающих гумат калия, выше контрольного значения на 28,74% (P<0,05). Активность щелочной фосфатазы в ходе эксперимента повышалась у цыплят в возрасте 5-30 суток, а затем наблюдалось ее снижение. Значение активности ЩФ на 45 сутки у животных опытной группы было ниже контрольных значений на 12,82% (P<0,05). Наблюдается снижение активности каталазы на 13,22% (P<0,05) относительно такового показателя контрольной группы цыплят. Незначительные колебания этого показателя были отмечены у 5-45-суточных цыплят-бройлеров опытной группы. Концентрация малонового диальдегида у цыплят опытной группы была ниже контрольного значения на 11,40% (P<0,05), что связано с высокой активностью глутатионпероксидазы у цыплят контрольной группы. Заключение. При введении в рацион подопытной птицы гумата калия на 45 сутки наблюдается повышение активности таких ферментов печени, как аланинаминотрансферазы, аспартатаминотрансферазы, супероксиддисмутазы, глутатионпероксидазы, а также снижение активности щелочной фосфатазы и каталазы.

Об авторах

Екатерина Александровна Грибанова

ФГБОУ ВПО Казанская ГАВМ им. Н. Э. Баумана

Email: study@ksavm.senet.ru
соискатель кафедры «Физиология и патофизиология» 420029, г. Казань, Сибирский тракт, 35

Руфия Габдельхаевна Каримова

ФГБОУ ВПО Казанская ГАВМ им. Н. Э. Баумана

Email: study@ksavm.senet.ru
д-р биол. наук, проф. кафедры «Физиология и патофизиология» 420029, г. Казань, Сибирский тракт, 35

Список литературы

Дополнительные файлы