Leukogram recovery and increase of egg productivity of geese with candidamycosis digestive tract

Full Text

Биологически активный продукт пчеловодства – прополис – содержит жизненно важные макро- и микроэлементы: калий, натрий, кальций, марганец, хром, цинк, барий, медь, олово, кобальт, титан, никель, ванадий; витамины – А, В₁, В₂, В₆, С, Е, РР; глюкозу, фруктозу, коричный спирт. Такой состав обуславливает бактерицидное, вирусоцидное, бактериостатическое, фунгицидное, регенерационное действие прополиса. В нём содержатся феруловая, бензойная, кофейная кислоты, изальпин, пиноцебрин, галантин. Одним из активных компонентов прополиса является флавоноид хризин, который способен противостоять разрушительному действию свободных радикалов. В состав прополиса входят аминокислоты: аланин, бета-аланин, альфа и бета-аминомасляные кислоты, аспарагин, аспарагиновая кислота, гидроксипролин, глицин, глутаминовая кислота, орнитин, пироглутаминовая кислота, пролин, саркозин, серин, тирозин, цистин, цистеин, а также незаменимые аминокислоты: аргинин, изолейцин, лизин, лейцин, метионин, треонин, триптофан, фенилаланин, гистидин [5, 8, 9, 10]. В целом в прополисе насчитывается до 300 веществ. Под действием ферментов глоточных желез богатый химический состав прополиса пчел приобретает уникальность и действует разносторонне. Под действием энзимов пчелы компоненты прополиса теряют антагонистическое действие, которое они имеют при рассмотрении их в качестве отдельных химических соединений [1, 8, 10].

Во всем мире кандидамикозы пищеварительного тракта гусей наносят большой экономический ущерб гусеводству. До настоящего времени поиск эффективных мер профилактики и методов терапии – нерешенная проблема [3]. Это связано также с тем, что с целью получения наибольшего выхода продукции, в условиях промышленного производства, на все системы организма гусят оказывается предельная физиологическая нагрузка. Гусятам последовательно назначают с кормами антибактериальные, антипротозойные препараты, активаторы и стимуляторы роста и развития: ферменты, аминокислоты, поливитамины, макро- и микроэлементы. Их вакцинируют против вирусного энтерита, сальмонеллеза, пастереллеза, холеры. Несбалансированный иммунный статус и нервная система организма гусят такое активное воздействие воспринимают как сильный стрессовый фактор. На этом фоне нередки случаи развития у гусей кандидамикозов пищеварительного тракта. Падеж от кандидамикозов пищеварительного тракта может достигать до 80-90%. В этой связи решение данного вопроса сегодня является для гусеводства востребованным и актуальным [2, 4, 6].

Одним из направлений борьбы с кандидамикозами пищеварительного тракта является исследование ферментов, воздействующих на Candida albicans. К ним относится литиказа, которая разрушает маннопротеиновый комплекс кандид [7].

Цель исследований – разработать научно обоснованную систему изменения морфофункциональных реакций клеток крови при кандидамикозах пищеварительного тракта гусей и их восстановления под влиянием микробного энзимного препарата литиказы с адаптогенами: пробиотиком и прополисом для повышения сохранности и яичной продуктивности птиц.

Задачи исследований – установить морфофункциональный процесс распознавания и блокирования активности Candida albicans базофилами, определить степень их фагоцитоза псевдоэозинофилами; изучить повышение в организме продукции и реакции эозинофилов, лимфоцитов и моноцитов при кандидамикозах пищеварительного тракта гусей и на фоне действия энзима литиказы с адаптогенами.

Материал и методы исследований. Работа выполнялась в 2019 г. на 1470 гол. гусей в условиях птицеводческих хозяйств по разведению гусей, республиканских и районных ветеринарных лабораторий республик Татарстан и Башкортостан, лабораторий кафедры микробиологии и иммунологии Российского государственного аграрного университета – Московской сельскохозяйственной академии имени К. А. Тимирязева. Проводились исследования крови гусей породы Линда с 7- до 90-суточного возраста. Материал для исследований брали до начала опыта (у 7 суточных гусят) – фон, а затем на 14, 30, 60, 90, 120 и 150 сутки от начала дачи препаратов. Птиц, по принципу аналогов, разделили на 7 групп. Первая группа – контрольная – здоровые птицы, 2-7 группы – гусята, больные кандидомикозом пищеварительного тракта. С птицами 2 группы никакие лечебные манипуляции не проводились. Гусей 3 группы подвергали традиционной антибиотикотерапии нистатином, 4 группы – энзимотерапии Литиказой, 5 группы – энзимотерапии на фоне пробиотикотерапии препаратом Субтилис-С, 6 группы – энзимотерапии на фоне прополисотерапии, 7 группы – комплексной энзимотерапии на фоне пробиотико- и прополисотерапии.

Пробиотик Субтилис-С (НИИ Пробиотиков, г. Москва) содержит штаммы бактерий, которые обладают ярко выраженной антагонистической активностью по отношению к клостридиям, эшери-хиям, сальмонеллам, стафилококккам. Являются иммуностимуляторами: активируют антителогенез, фагоцитоз, выработку интерферона. Продуцируют пищеварительные ферменты липазу, протеазу, амилазу, пектиназу, эндоглюконазу, ксиланазу и фитазу, что повышает усвояемость кормов. Продуцируют витамины и аминокислоты, в т. ч. незаменимые. Оказывают антитоксическое воздействие.

Гематологические исследования проводили на гематологическом ветеринарном анализаторе «РСЕ-90 Vet», зоотехнические исследования – классическими методами. Статистический анализ количественных данных проводили с использованием программ Statistica 6.1 и приложения Excel из пакета MS Office 2007.

Результаты исследований. Уровень базофилов в крови гусей 1 контрольной группы увеличивался в возрастном аспекте в пределах физиологических значений. К началу исследования (7 сутки) они составили в крови гусят 1 группы 0,6%. К 14, 30, 60 и 90 суткам их содержание увеличилось в 1,36; 1,55; 1,86 и 1,96 раза, соответственно.

Показатель базофилов в крови гусей 2 группы к 7 суткам опыта был ниже, по сравнению с контрольным показателем, в 2,4 раза. В процессе эксперимента значение уступало контрольным цифрам птиц 1 группы на 14, 30, 60 и 90 сутки – в 2,73; 2,66; 2,0 и 1,9 раза. Такая динамика содержания базофилов в крови гусей 2 группы свидетельствует об участии базофилов в процессе морфофункционального распознавания и блокирования активности кандид. Однако процесс выработки и снабжения организма базофилами красным костным мозгом у больных птиц 2 группы очень подавлен и недостаточен для полноценного выполнения функций базофилов на фоне развития в организме кандидамикозов пищеварительного тракта. Содержание базофилов в крови гусей 3 группы после антибиотикотерапии изменялось в сторону умеренного повышения, по сравнению с данными птиц 2 группы, на 7, 14, 30, 60 и 90 сутки от начала опытов, в 1,1; 1,14; 1,16; 1,51 раза. Следовательно, антибиотикотерапия является недостаточной для восстановления баланса базофилов. Это обусловлено тем, что антибиотический препарат нистатин оказывает супрессивное действие на организм гусей, затормаживая иммунные механизмы, что также зафиксировано при исследовании факторов естественной резистентности и функциональной активности центральных и периферических органов иммуногенеза. В этой связи для разрушения маннанопротеинового комплекса, с целью уничтожения кандид, для гусят 4 группы был взят микробный энзим литиказа, а также литиказа с пробиотиком (для гусят 5 группы) и литиказа с прополисом (для гусят 6 группы). Показатели уровня базофилов в крови гусят 4, 5 и 6 групп превысили данные не только птиц 2 группы, но и значения у птиц 1 контрольной группы и у птиц 3 группы. Так, содержание базофилов в крови гусей 4, 5 и 6 групп увеличилось, по сравнению с параметрами больных гусей 2 группы, на 14 сутки опыта в 1,4; 1,2 и 1,76 раза, на 30 сутки – в 2,28; 1,66 и 2,05 раза, на 60 сутки – в 1,75; 1,36 и 1,96 раза, на 90 сутки – в 1,95; 1,55 и 1,9 раза. Самое высокое содержание базофилов, отвечающее физиологическому значению, было в крови гусей 7 группы, которые на фоне лечения микробным энзимом литиказа подвергались терапии пробиотиком и прополисом в комплексе. Показатели гусей этой группы, во все сроки опыта, превышали данные по уровню базофилов в крови всех других групп.

Значительные изменения на фоне кандидамикозов желудочно-кишечного тракта гусей отмечались со стороны псевдоэозинофилов крови. У птиц 1 контрольной группы их максимальное значение регистрировалось на 7 сутки эксперимента. Однако в последующие сроки опыта, особенно к 14 суткам, данный показатель значительно снизился, по сравнению с уровнем на 7 сутки исследований, с последующим умеренным повышением по срокам опыта.

Содержание псевдоэозинофилов в крови гусей 2 группы на 7, 14, 30, 60 и 90 сутки снизилось, по сравнению с контрольными цифрами, в 2,94; 2,57; 1,95; 2,6 и 2,09 раза. Это является свидетельством развития в организме инфекционного процесса в связи с поражением всего желудочно-кишечного тракта кандидами и на этом фоне активизацией условно-патогенных микроорганизмов. В результате этого псевдоэозинофилы, участвующие в клеточной защите, стремятся к очагу воспаления, и их количество в крови падает. В крови птиц 3, 4, 5, 6 и 7 групп отмечается постепенная дислокация псевдоэозинофилов снова в кровь, а в 4, 5, 6 и, особенно, 7 группах прослеживается дополнительная активизация продукции этих клеток красным костным мозгом. Так, псевдоэозинофилы в крови гусей 3 группы превысили показатели птиц 2 группы на 7, 14, 30, 60 и 90 сутки в 1,86; 2,39; 1,55; 1,94 и 1,68 раза, но уступали контрольным показателям.

Содержание псевдоэозинофилов в крови гусей 4, 5 и 6 групп превышало (во все сроки опыта и по всем группам) не только данные птиц 2-й, а с 14 суток – и 1-й контрольной группы. К этому периоду опыта уровень псевдоэозинофилов в крови гусей этих групп увеличился, по сравнению с данными 2-й группы, в 3,28; 3,55 и 3,75 раза. К концу опыта уровень псевдоэозинофилов в крови гусей 4, 5 и 6 групп незначительно снизился, по сравнению с данными предыдущего срока исследования, но был достоверно выше, по сравнению с показателями птиц 1 и 2 групп. Это показывает стабилизацию продукции псевдоэозинофилов в организме птиц, вызванную иммунологическими реакциями, свидетельствующими об изменениях в сторону выздоровления. Более выраженная активизация псевдоэозинофилов отмечалась в организме гусей 7 группы, что является показателем удачного сочетания компонентов и комплексного действия энзима литиказы и адаптогенов – пробиотика Субтилис С и прополиса.

На фоне развития кандидамикоза в крови птиц отмечается эозинопения (табл. 1), что также связано с общим ослаблением иммунных механизмов в организме птиц. Этот процесс был достоверным уже с 7 суток от начала опыта. До конца опыта в организме гусей 2 группы наблюдалось динамичное развитие эзинопении и на 7, 14, 30, 60 и 90 сутки исследований их количество снизилось в крови, по сравнению с контрольным значением, в 1,26; 1,43; 2,0; 1,87; 1,92 раза. Развитие эозинопении в организме птиц на фоне кандидамикоза объясняется его стрессированным состоянием, развитием воспалительных процессов по всему пищеварительному тракту, снижением естественных защитных механизмов, анемией, недостаточным усвоением витамина В12 и другими сопутствующими этиологическими факторами, развивающимися в организме с данной патологией, которые описаны во многих предыдущих работах авторов [2, 3]. Усиление продукции костным мозгом эозинофилов отмечалось как ответ на все проведенные лечебные манипуляции с больными птицами опытных групп. Но этот процесс имел разную степень выраженности и проявления. Традиционная антимикотикотерапия способствовала затормаживанию эозинопении с последующим умеренным повышением уровня эозинофилов в крови, но до донца опыта уровень эозинофилов в крови птиц 3 группы не достигал физиологического значения.

 

Таблица 1. Влияние кандидамикозов и разных методов терапии на динамику эозинофилов и лимфоцитов в крови гусей (в %)

Сроки опыта, сутки	Статистический показатель	Группы
		1	2	3	4	5	6	7
Эозинофилы
7	М	6,3	5,0**	5,0**	5,4*	5,3*	5,4*	5,8
	±m	0,29	0,23	0,20	0,12	0,25	0,15	0,29
	cv, %	12,04	11,33	9,58	5,30	10,86	6,17	10,74
14	М	6,0	4,2***	5,3**	5,7	5,5	5,5	6,0
	±m	0,14	0,11	0,25	0,18	0,26	0,25	0,22
	cv, %	5,23	5,27	10,65	8,38	10,72	11,52	8,36
30	М	6,8	3,4***	5,4***	7,0	6,8	7,2	7,5
	±m	0,14	0,25	0,22	0,27	0,27	0,23	0,29
	cv, %	5,62	17,56	9,14	9,71	9,40	7,68	9,73
60	М	6,0	3,2***	5,7	7,6*	7,2	7,4	7,7
	±m	0,27	0,23	0,49	0,52	0,60	0,66	0,46
	cv, %	11,82	10,56	20,08	16,83	20,42	23,09	14,82
90	М	5,2	2,7***	5,8	6,2*	6,0	6,4*	6,8***
	±m	0,26	0,32	0,21	0,32	0,55	0,36	0,15
	cv, %	10,71	20,58	6,70	10,39	16,89	10,01	4,71
Лимфоциты
7	М	45,7	40,2	47,9	52,2	50,6	54,3*	58,0**
	±m	2,09	3,97	1,73	4,11	4,49	2,47	2,37
	cv, %	12,22	26,27	9,56	20,83	23,35	11,94	10,72
14	М	47,0	26,3***	34,2**	64,6***	65,4	68,2***	72,0***
	±m	2,15	1,69	2,37	2,16	3,01	1,87	2,24
	cv, %	13,52	16,37	20,35	9,72	15,44	8,24	9,38
30	М	50,9	19,8***	38,9*	70,8***	60,2*	73,0**	76,3***
	±m	2,60	0,53	3,19	2,23	2,52	4,07	2,21
	cv, %	15,08	7,08	22,98	9,55	12,36	16,99	8,78
60	М	62,6	14,2***	40,3***	72,2*	66,4	75,3**	77,5*
	±m	2,20	1,27	2,28	3,10	3,71	1,87	4,15
	cv, %	10,44	25,38	15,64	13,03	16,72	7,37	16,28
90	М	68,6	10,9***	36,0***	74,6	68,3	76,3	78,0
	±m	5,04	1,28	2,66	1,88	2,49	2,21	6,47
	cv, %	22,19	24,65	21,07	7,58	10,76	8,84	24,68

Примечание. Здесь и далее: * – Р³0,95, ** – Р³0,99, *** – Р³0,999.

 

На фоне кандидамикозов ослабляется функция фагоцитоза не только псевдоэозинофилов, но и макрофагов, что видно из динамики их предшественников – моноцитов (рис. 1), которые в крови контрольных гусей имели с возрастом тенденцию к повышению, а у больных кандидамикозом птиц 2 группы – функция красного костного мозга по продукции моноцитов значительно снижается. На 7, 14, 30, 60 и 90 сутки содержание моноцитов в крови больных птиц ниже, чем в крови птиц контрольной группы, в 1,88; 2,0; 2,7; 6,85 и 10,4 раза.

 

Рис. 1. Степень активизации продукции в организме моноцитов – предшественников макрофагов, как следствие усиления фагоцитоза в органах гусей при кандидамикозах под действием микробного энзима с адаптогенами (в %)

 

Антимикотикотерапия нистатином (3 группа) способствовала некоторому повышению уровня моноцитов в крови гусей, по сравнению с показателем птиц 2 группы, на 7, 14, 30, 60 и 90 сутки – в 1,12; 1,6; 2,0; 3,85 и 6,0 раз. Однако данные по 3 группе значительно уступали параметрам здоровых гусей 1 группы. Энзимотерапия (4 группа), энзимотерапия на фоне пробиотикотерапии (5 группа) и энзимотерапия на фоне прополисотерапии (6 группа) способствовали восстановлению баланса моноцитов в крови гусей. При этом на 30 и 60 сутки уровень моноцитов в крови гусей 4, 5, 6, групп превысил данные во 2 группе в 3,6 и 7,14; 3,7 и 4,42; 3,7 и 7,28 и 4,9 и 7,85 раза. Через 90 суток от начала опытов уровень моноцитов в крови гусей 4, 5, 6 и 7 групп продолжал повышаться, что, видимо, связано с активацией в последующем процессов фагоцитоза макрофагов, как завершающий этап борьбы организма с остатками кандид и продуктов их распада. К этому периоду исследований уровень моноцитов в крови птиц 4, 5, 6 и 7 групп был выше значения у птиц 2 группы в 11,0; 11,2; 11,4 и 11,8 раза.

Проведенные курсы манипуляций при кандидозах гусей с применением энзимного препарата и адаптогенов: пробиотика и прополиса и их композиционных форм имели непосредственное отражение на показателях яичной продуктивности гусынь, что видно из таблицы 2. Изучение продуктивности гусынь по 1 яйцекладке проводили с февраля по июнь в трех сериях опытов в течение трех лет.

 

Таблица 2. Яичная продуктивность гусынь по 1-й яйцекладке (средняя по трём сериям опытов)

Показатель	Группы
	1	2	3	4	5	6	7
Среднее поголовье, гол.	380,0	380,0	380,0	380,0	380,0	380,0	380,0
Количество яиц, шт.	14236,0**	9800,0	12439,0*	14180,0**	14880,0**	15115,0***	15562,2***
Яйценоскость на гусыню, шт.	37,46***	25,79	32,73**	37,32***	39,16***	39,78***	40,95***
Масса яйца, г	140,60**	96,00	109,40*	139,30***	147,80***	150,40***	159,50***
Яйцемасса, кг	2001,61**	940,79	1360,61**	1974,12***	2199,62***	2273,27***	2482,01***
Интенсивность яйценоскости, %	31,22**	21,49	27,28**	31,10***	32,63***	33,15***	34,13***

 

Представленные данные подчеркивают важность принятия в гусеводческих хозяйствах мер по профилактике кандидамикозов пищеварительного тракта с применением энзимного препарата в комплексе с пробиотиком и прополисом.

Заключение. Кандидамикозы вызывают в крови гусей нарушение баланса базофилов, псевдоэозинофилов, эозинофилов, лимфоцитов, моноцитов, как защитную реакцию на развитие инфекционного процесса, вызванного активным размножением в пищеварительной системе дрожжеподобных грибов Candida albicans. Традиционная антимикотикотерапия нистатином не восстанавливает нарушенную лейкограмму до физиологического уровня. Микробный препарат литиказа значительно усиливает в организме птиц процессы пролиферации и дифференциации красным костным мозгом иммунокомпетентных клеток и снабжение ими крови. Энзим литиказа с адаптогенами: пробиотиком и прополисом способствует повышению в крови содержания базофилов в 2,4; псевдоэозинофилов – в 2,93; эозинофилов – в 2,52; лимфоцитов – в 7,15; моноцитов – в 11,8 раза, а также повышению яичной продуктивности гусынь: увеличению яйценоскости в 1,59, яйцемассы – в 1,67 раза; улучшению инкубационных качеств яиц и повышению сохранности гусынь в 2,42 раза.

About the authors

Rustem R. Shaikhulov

Russian State Agrarian University – Moscow Agricultural Academy named after K. A. Timiryazev

Email: provimirb@mail.ru
ORCID iD: 0009-0001-6085-0811

Candidate of Biological Sciences

Russian Federation, Moscow

Ramzia T. Mannapova

Russian State Agrarian University – Moscow Agricultural Academy named after K. A. Timiryazev

Author for correspondence.
Email: ram.mannapova55@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-9092-9862

Doctor of Biological Sciences, Professor

Russian Federation, Moscow

References

Supplementary files